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肝癌耐药重大突破PSTK的曲线救 [复制链接]

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肝细胞癌(HCC)是最常见的癌症之一,与不良的患者预后有关,靶向细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)的小分子药物可抑制其发展,但治疗耐药性的出现会降低肝癌患者靶向治疗的有效性。最近有研究发现PSTK抑制剂可克服肝癌耐药,PSTK是何方神圣?又是如何克服肝癌耐药的呢?

医院梁军教授团队通过CRISPR筛选,得到了一种驱动HCC细胞对治疗药物产生耐药机制的方法。并通过这种方法发现PSTK(磷酸丝氨酰-tRNA激酶)是一种重要的RNA依赖性激酶,也是HCC细胞对靶向治疗产生抗性的关键介导因子,可通过抑制铁死亡诱导起作用。

铁死亡是一种铁依赖性的,区别于细胞凋亡、细胞坏死、细胞自噬的新型的细胞程序性死亡方式。其的本质是谷胱甘肽的耗竭、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)活性下降、脂质氧化物不能通过GPX4催化的谷胱甘肽还原酶反应代谢,之后二价的铁离子氧化脂质产生活性氧,从而促使铁死亡的发生。

因癌细胞比正常细胞利用更高水平的铁以促进其更具侵袭性的生长,且对铁诱导剂更敏感,因此,铁诱导物有望治疗肿瘤耐药,特别是在HCC中。

CRISPR筛选结果

PSTK抑制铁死亡诱导

谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)是铁中毒的中心调节因子,可减轻铁中毒过程的毒性。PSTK是参与硒代半胱氨酸生物合成的关键激酶,而硒代半胱氨酸是GPX蛋白的活性中心,因此PSTK的调控可以使HCC对靶向治疗诱导的铁离子中毒产生抗性。

肝癌患者PSTK过度表达与Gpx4表达

例如,在使用Abemaciclib、Sorafenib或Erastin进行靶向治疗时,会导致HCC细胞中产生明显的铁离子信号(图AC),且PSTK-KOHCC细胞会显示较低的GPXs和GPX4基线活性(图D)、PSTK-KOHep3B细胞会表现出较高的ROS基线水平,并且这些水平在靶向治疗后会进一步放大(图E),但是PSTK可通过维持GPX4的活性来抑制铁离子的诱导。

同时,作者通过RNA-seq分析,以及对差异表达基因进行KEGG富集分析(图A)发现,敲除PSTK后,磷酸化铁蛋白相关基因表达有明显差异(图B),嗜铁基因组呈负富集(图C),与铁卟啉相关的关键保护因子下调(图D)。

细胞内氧化磷脂水平显著增加,GSH(谷胱甘肽)转化为GSSG(氧化型谷胱甘肽)。GSH合成过程中的关键成分,γ-谷氨酰半胱氨酸、半胱氨酸甘氨酸和半胱氨酸水平显著降低,胱氨酸和谷氨酸水平不会明显变化。此外,与叶酸生物合成相关的关键代谢产物水平降低,包括叶酸和5-甲基四氢叶酸。

由此可见,GSH的耗竭和一些直接、间接的靶向机制,都可以导致GPX4失活,而且除抑制体系SystemXc-外,直接抑制GSH的合成也可诱导铁细胞凋亡。因此可通过调控PSTK维持GPX4的活性和GSH的合成来保护HCC细胞免受铁细胞死亡的诱导。

PSTK抑制剂

作者利用TargetMol的化合物库进行了基于结构的虚拟筛选以识别PSTK抑制剂。排名前10的化合物对接得分如图所示。通过结合模式分析,选取了4个具有代表性的化合物,其中两种可水解的单宁(Punicalin和Geraniin)对PSTK活性袋的结合亲和力最高。

这两种单宁直接用于治疗HCC细胞时,会使得HCC细胞对索拉非尼更加敏感,且肿瘤细胞中GPX4蛋白水平会显著降低。

同时,在一项动物研究中发现Punicalin/geraniin与Sorafenib一起口服后,Punicalin与Sorafenib协同作用能够显著抑制肿瘤生长。

因此,使用Punicalin阻断PSTK激酶活性可能是克服肝癌中索拉非尼耐药的一种有效手段。

综上所述,作者的研究首次确定了PSTK是肝癌细胞铁死亡抵抗的关键介质。从机制上讲,PSTK的耗竭与硒代半胱氨酸依赖的Gpx4激活、谷胱甘肽代谢和叶酸合成的抑制有关,并可导致亚致死性铁死亡的诱导,从而使肝癌细胞对能够诱导铁死亡的靶向治疗更加敏感。因此,抑制PSTK可能是克服肝癌患者靶向治疗耐药性的一种新颖可行的方法,该蛋白的抑制剂值得进一步的临床研究。

References

1.Chen,Y.,Li,L.,Lan,J.etal.CRISPRscreensuncoverprotectiveeffectofPSTKasaregulatorofchemotherapy-inducedferroptosisinhepatocellularcarcinoma.MolCancer21,11().

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