谷氨酰转移酶YGT,EC2,3, [复制链接]

γ-谷氨酰转移酶Gamma-glutamyltransferase又称γ-谷氨酰转移酶；（γ-谷氨酰)肽：氨基酸；Y-谷氨酰转移酶；YGT或GGT；EC.2.3.2.2。γ-谷氨酰转移酶（GGT）是将谷胱甘肽上γ-谷氨酰基转移至另一个肽或氨基酸上的酶。GGT在肾脏中表达最高，其次是胰脏和肝脏。正常人血清γ-谷氨酰转移酶主要来自于肝脏，当肝内合成亢进或胆汁排出受阻时，血清中γ-谷氨酰转移酶升高。因此，γ-谷氨酰转移酶可用于鉴别肝脏系统的疾病。

一、概况

1.反应式

2.米氏常数

人血清γ-谷氨酰转移酶与N-γ-谷氨酰-a-萘酰胺底物起反应，若用甘氨酰-甘氨酸作受体，以Tris-缓冲液pH9.0，则测得的Km值为5.8x10-4M。

3.专一性

γ-谷氨酰转移酶既有催化水解作用，又有转移作用。发现由菜豆来源的此酶在pH7.5时无转移活性，但在pH9.5时，则既具有转移酶活性又有水解酶活性，两者活性比值为1.5。此酶对于a-L-或γ-D-谷酰基衍生物几无活性。

对于人血清γ-谷氨酰转移酶来说，已成功地选用了几种L-γ谷酰基衍生物，诸如对-硝基酰替苯胺、a-与β-萘酰胺以及酰替苯胺之类底物。甘氨酰替甘氨酸通常作为受体。在无受体存在下，此酶对这两种底物分子既会发生水解作用，还会进行肽基转移作用。

4.临床意义

血清中GGT活性的增加，仅在肝脏、胰腺以及胆管等疾病中发现。出现极高活性值则表明患胆汁阻塞症状。测定无黄疸病人的GGT活性，则对肝病与胆汁管疾病能有效地进行筛选试验。在肝胆疾病中，碱性磷酸酯酶、白氨酰氨肽酶与GGT三者之间具有相互关系，但是GGT的变化最为灵敏。血清中正常值是：女人为4~18单位/升，男人为6~28单位/升。

5.稳定性

人血清中γ-谷氨酰转移酶保存在-20~20℃温度下，至少能稳定1周时间。

二、测定方法

1.分光光度法

最常用的方法是采用γ-谷酰基-对-硝基酰替苯胺作底物。

所产生的对-硝基苯胺于nm处有吸光性，GGT活性与每单位时间释放的对-硝基苯胺量成正比。采用半自动化方法，每小时能进行60个样品测定。

推荐的其它一些显色底物是：L-γ-谷酰萘基酰胺、L-γ-谷酰基酰替苯胺以及L-γ-谷酰基-对-硝基酰替苯胺。

γ-谷氨酰转移酶催化γ-谷氨酰-3-羧基-对-硝基苯胺生成γ-谷氨酰双甘氨肽和5-氨基-2-硝基苯甲酸盐，生成的5-氨基-2-硝基苯甲酸盐速率与样本的γ-GT活性成正相关，在nm处监测吸光度上升速率，即可计算出样本中γ-谷氨酰转移酶的活性。

2.荧光测定

一种荧光法测定液态的与半固体表面的γ-谷氨酰转移酶活性，所用的底物是N-γ-L-谷酰基-a-萘酰胺；测量所产生的a-萘基苯胺的荧光度：

激发波长：-nm；发射波长：nm。

所需的血清量仅10~50微升，并且以动力学直接测定，在2~3分钟内即可完成。GGT浓度在26.5~单位/升范围内比例关系甚佳，由此可测得荧光度的变化速度(Δf/Δt)，而且，精确度相当理想(约2~3%)。

可通过串联酶试验测定GGT活性，其中GGT转移淬灭底物L-γ-谷氨酰胺-7-酰胺基-4-甲基香豆素(L--谷氨酰-AMC)的γ-谷氨酰基团，释放荧光基团7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)(λex=nm/λem=nm)与GGT活性成正比。在37℃下，一个单位的GGT每分钟生成1.0μmolAMC的酶量。