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BrdU检测怎么做 [复制链接]

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伯远医学是武汉伯远生物科技有限公司旗下全新开展的医学服务平台。伯远生物成立于年7月26日,位于东湖高新技术开发区光谷生物城武汉生物技术研究院B8栋。伯远生物专注于前沿分子生物学技术在生命科学研究和人类健康领域的应用和创新,致力于成为全球领先的基因科技产品和服务提供者。细胞增殖是生活细胞的重要生理功能之一,是生物体的重要生命特征,是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。检测细胞增殖的能力是评价细胞、代谢、生理、病理状况、细胞活性、基因毒性等的重要指标之一。细胞增殖与多种因素有关,比如细胞代谢活性、与细胞增殖相关的蛋白表达、ATP的浓度等等。

背景说明

背景说明

细胞增殖周期包括G1、S、G2、M期4个时期,其中S期是DNA合成期,细胞内DNA进行半保留复制,各种构成DNA的原料掺入到DNA中。BrdU(5-bromodeoxyuridine)作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物(其化学结构特点是胸腺嘧啶的碱基嘧啶环上与5位C原子连接的甲基被溴代替),与胸腺嘧啶核苷一样可掺入到细胞合成的DNA中,当细胞处于DNA合成期(S期)而同时又存在BrdU时,BrdU就可经活体注射或细胞培养插入复制的DNA双链中,且这种置换可以稳定存在,并且可以进一步带到子代细胞中,只要细胞不死亡,其就会在细胞核DNA中长期存留。

掺入到DNA的BrdU可通过免疫学方法、流式细胞术(FCM)、酶标仪检测吸光值(OD值)等方法检测DNA中BrdU的含量,从而判断细胞的增殖能力。

服务流程

服务流程

体外实验

客户在线下单——订单/实验材料确认——细胞处理或组织切片——BrdU标记——固定、变性、中和——血清封闭——一抗孵育——二抗孵育——DAPI复染(可选)——中性树胶封片——荧光显微镜镜检——BrdU阳性细胞计数——出具实验报告——结果交付

注:二抗孵育后可选流式细胞术分析或酶标仪检测。

体内实验

客户在线下单——订单/实验材料确认——可选体内注射BrdU标记的细胞或连续注射BrdU至相应组织——模型饲养——取相应组织进行组织切片——后续同体外实验

注:体内注射BrdU后,也可进行活体示踪。

服务内容及说明

服务内容及说明

适用范围

1、细胞因子、生长因子、分裂素和营养因子刺激后,监测和定量细胞增殖;

2、分析药物细胞毒性,如抗癌药物等;

3、分析不同成分对细胞增殖的抑制或者刺激作用;

4、跟踪检测抑制细胞的存活、分化和功能状态。

客户下单及项目信息填写

请客户按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式,提交项目所需要的具体信息,包括:

1、细胞类型与名称、体内模型、注射剂量、注射时间点等;

2、检测时间节点;

3、尽可能丰富的相关资料、文献。

实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看网址。实验结题后,实验报告、检测结果可在线查看或打印,并永久保留。

实验周期

致电详询

实验交付内容

1、所有实验的原始数据(包括实验过程、实验试剂与设备等);

2、检测报告与结果分析(可选BrdU荧光图片或流式细胞术结果或试剂盒检测、结果统计分析等);

3、具体实验报告。

BrdU的优点

该方法可对细胞增殖能力进行稳定检测,经BrdU标记的细胞只要不受紫外照射等外界影响,其对细胞本身就无功能损伤。

BrdU的缺点

1、BrdU抗体分子量较大,无法直接与DNA双链上的BrdU结合,必须使DNA变性,过程中会破坏抗原识别位点;

2、BrdU检测过程需多次长时(几小时甚至过夜)孵育,耗时较长。

文献示例

文献示例

图免疫组织化学法显示BrdU,检测细胞增殖(Wangetal.,)

参考文献

WangC,ChenX,DingX,etal.Exendin-4PromotesBetaCellProliferationviaPI3k/AktSignallingPathway.CellPhysiolBiochem.;35(6):-.

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