美谷分子基于SpectraDrop微量检 [复制链接]

介绍

紫外吸收法是一类迅速，无损的蛋白定量方法。同时该方法无需额外的试剂和标准品，非常简便。其主要利用了蛋白中色氨酸和酪氨酸残基在近紫外光区有吸收。通常我们可以通过紫外分光光度计或具有紫外检测能力的酶标仪完成针对蛋白的紫外吸收法检测。

用经典的基于比色皿的分光光度计进行蛋白浓度检测时，一般需要较大的样本体积，同时检测范围也相对有限(0.05至2mg/mL)。相比下，取决于使用的仪器和板材，基于酶标仪的检测可提供更广一些的检测范围。然而，上述的两类检测方法的检测上限(2至5mg/mL)限制了其对高浓度蛋白样本的精确检测，而稀释样本又会引入不必要的溶解性影响和操作误差。

对此，SpectraDrop微量检测板为低达2μL的微量样本分析提供高通量解决方案。SpectraDrop微量检测板配备了专门设计的，符合国际标准尺寸(SBS)占用标准的底架和上下两个滑块。具有特氟龙涂层的底部滑块可用于分析24或64样本，而顶部滑块则配有降低蒸发的垫片(图1)。通过配备0.5mm或1mm垫片的顶部滑块，SpectraDrop微量检测板可用于检测2μL样本(光径0.5mm)或4μL样本(光径4mm)。

图1SpectraDrop微量检测板构成

该应用指南展示了SpectraDrop微量检测板针对牛血清白蛋白(bovineserumalbuminBSA)的浓度线性检测范围。在不需要样本稀释的前提下，SpectraDrop微量检测板可对从0.mg/mL到高达mg/mL的蛋白样本进行精确检测。

优势

最少只需2μL样本

支持同时24或64样本的高通量检测

线性动态范围高于3.5个数量级

针对高浓度样本的直接精确检测

实验材料

PBS缓冲液

30%BSA(溶于PBS)

1.5ml低蛋白吸附管(Eppendorfcat.#)

SpectraDrop微量检测板

石英分光光度计(StarnaCellscat.#21-Q-10)

SpectraMaxi3/i3x多功能酶标仪

SpectraMaxPlus单功能光吸收酶标仪

方法

在1.5ml低蛋白吸附管准备BSA2倍稀释标准品，起始浓度为mg/mL。在64孔SpectraDrop底部滑块上按照图2所示以4重复形式加入样本。孔H21-K22只加入PBS做为板对照。加入样品后，微量检测板分别放入SpectraMaxi3/i3x多功能酶标仪和SpectraMaxPlus多功能光吸收酶标仪，用SoftMaxPro软件按照预设的模板自动进行扣背景和标准曲线拟合分析处理。作为对照，同样的样本(2mL上样量)也加入石英比色皿进行分析。

图2微量检测板布局图

结果

对于2μL蛋白样本，SpectraDrop微量检测板的线性动态范围约为0.到mg/mL。上样体积提升到4μL后线性动态范围转变成0.到50mg/mL。两种上样体系下，SpectraDrop微量检测板可检测的浓度范围均在3.5个数量级以上(图3)。

图3利用SpectraDrop微量检测板对BSA浓度检测的线性和动态检测范围。蓝点指示4μL样本体系；红点指示2μL样本体系。两种体系下标准曲线R方值均大于0.99

相较于基于比色皿的检测，微量检测板可使蛋白浓度的检测范围提高16倍(图4)。这是因为微量检测板可以减少样本的光径长度。比色皿的样本光径是固定的1cm，因此当样本浓度过高超过对应的检测范围时，样本必须经过稀释来保证测量的精确度。对应的，在SpectraMaxPlus多功能光吸收酶标仪上可观察到BSA浓度的定量限约为6mg/mL，而通过SpectraDrop微量检测板降低光径至0.5mm则可以做到对高达mg/mL的2μL蛋白样本浓度的精确测定。

图4对比SpectraDrop微量检测板和1cm比色皿的BSA浓度检测效果。蓝点指示SpectraDrop微量检测板检测体系，红点指示比色皿检测体系。样本量均为2μL。为了便于比较，SpectraDrop微量检测板的OD值均换算成光径为1cm时的数值。两种体系下R方值均大于0.99，但检测动态范围上SpectraDrop微量检测板可以做

结论

SpectraDrop微量检测板为用户提供了两大关键好处。一，它做到了对低至2μL的微量样本的蛋白浓度的精确检测。因此SpectraDrop微量检测板尤其适用于珍贵样品的检测。二，通过减少光径，SpectraDrop微量检测板可以做到对比色皿和微孔板无法支持的高浓度蛋白样本的定量。以BSA样本为例，SpectraDrop微量检测板的检测范围可达12μg/mL至mg/mL，动态范围在3.5个数量级上。