谷氨酸合成酶活性检测试剂盒（货号：AKAM）
谷氨酸合成酶（GOGAT）是植物体内氮素同化与循环的关键酶，可催化谷氨酰胺和α-酮戊二酸形成谷氨酸，与谷氨酰胺合成酶（GS）共同构成GS/GOGAT循环，参与氮的初级吸收与光呼吸释放氨的再吸收，以及吸收氨的同化和固氮作用，谷氨酸合成酶活力的测定对于了解氮代谢调控机制具有重要意义。
谷氨酸合成酶以NADH为电子供体，催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸形成谷氨酸，NADH在nm处具有特征吸收峰，通过测定NADH分解速率即可表征谷氨酸合成酶的活力。
GOGAT工作液的配制（现用现配）：使用前每瓶试剂二中加入30mL试剂一充分溶解；可分装后-20℃保存，避免反复冻融，平衡至室温后使用。
测定过程中所需要的仪器和试剂：紫外分光光度计、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.粗酶液的制备（可根据预实验结果适当调整样本量和比例）
①组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：（5-10）的比例（建议称取0.1g组织，加入1mL提取液）处理样品，冰浴匀浆，4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
②细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管内，按照细菌或细胞数量（10个）：提取液体积（mL）为（-）：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL提取液）处理样品，冰浴超声破碎（功率20%或W，超声3s，间隔10s，重复30次），4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
吸光值测定：①加入粗酶液的同时开始计时，测定20s（总时间）时nm处吸光值A1；②25℃准确反应s，测定s（总时间）时nm处吸光值A2；③计算A=A1-A2。
注意事项
①测定过程中样本应保持冰上放置，以免变性和失活；
②准确在20s和s处完成读数，以保证实验结果的准确性；
③若A1大于1.5或者A大于0.6时，建议将粗酶液使用蒸馏水稀释后再进行测定；若A过小时，可以适当延长酶促反应时间（10-15min）或加大样本量后再进行测量；
④提取液中含有约1mg/mL的蛋白，测定样本蛋白浓度时需要减去提取液自身的蛋白含量；
⑤为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
ForResearchUseOnly.NotforUseinDiagnosticProcedures.
