治疗白癜风的最好方法 http://www.jk100f.com/m/在血清中氨基酸是非蛋白氮的第二个最大来源，尿素为第一个最大的来源，在血清中它们彼此平行。总的血清氨基酸测定可提供很有价值的临床知识，其正常范围约为3~7毫克/毫升，只有在非常严重的肝病，例如肝黄萎缩时或者由于四氯化碳、氯仿引起化学毒害时，总的血清氨基酸才会显著升高。
尿液中氨基酸氮每天排出量为50~毫克/天，只有少数几种氨基酸如丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、谷氨酰和1-甲基组氨酸在50毫克/天以上，其它一般为5~20毫克/24小时。在排出的氨基酸中，约1/3以自由形式存在，其余的或者作为肽，或者以结合状态存在。和在血清中一样，尿液中氨基酸的增加反映肝有严重疾患，可是在饥饿引起蛋白质分解的临床情况下，也常观察到这种增加。
某些特殊氨基酸在相应的条件下可能升高。如黑酸尿患者的酪氨酸和尿黑酸(2,5-二羟苯乙酸)升高；苯酮尿患者的苯丙氨酸升高，苯丙氨酸的检测将在后面讨论；正常人血清中酪氨酸的水平为0.8~1.3毫克/毫升，而苯酮尿患者则降到0.55毫克/毫升。
体液内其它重要的氨基酸是半胱氨酸与胱氨酸(其中90%为胱氨酸，即主要取氧化的S-S形式)。检测胱氨酸通常取尿液或肾石进行。胱氨尿的特征是排泄大量包括胱氨酸在内的碱性氨基酸，同时有形成并沉积膀胱酸结石的倾向，这是一种遗传缺失的疾病。
虽然大多数实验室借助酶以外的分析试验检测的是总的D-氨基酸和L-氨基酸，但是只有那些具有生理意义的天然L-氨基酸才有临床意义。在羊和猪的肾组织中含有大量作用D-氨基酸的D-氨基酸氧化酶[D-氨基酸:氧氧化还原酶(脱氨)，EC.1.4.3.3]。
一、酶法检测D-氨基酸
D-氨基酸包括：D-丙氨酸、D-甲硫氨酸、D-苯丙氨酸、D-脯氨酸、D-色氨酸、D-酪氨酸和D-亮氨酸。
D-氨基酸氧化酶存在于所有哺乳动物，特别是羊和猪的肾与肝组织中，催化D-氨基酸脱氨
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因此，被这个酶催化氧化的D-氨基酸即使是在L-氨基酸和未反应的其它氨基酸存在的情况下，也能进行专一的测定。表3-1列举了羊肾来源的D-氨基酸氧化酶的一些底物。显然，这种酶的选择性不高，可以氧化许多D-氨基酸；猪肝来源的酶有类似的情形。用氨基酸氧化酶进行氨基酸分析的方法有以下几种：以瓦氏(Warburg)呼吸计通过测压法检测氧的吸收；用邻苯二胺(Wieland试剂)与形成的a-酮酸反应，然后对黄色产物进行紫外检测；以某些常用的色素原指示剂分析形成的过氧化物，或以铵离子选择性电极对产生的氨进行电化学测定。文献也设计了一种带有固定化D-氨基酸氧化酶的专一性电极，用以检测D-氨基酸。
有文献建议用荧光光度法检测D-氨基酸。即在过氧物酶存在情况下，使生成的过氧化物氧化无荧光的高香草酸为强荧光的2,2-二羟基-3,3-二甲基联苯-5,5-二乙酸，然后测定这种荧光化合物形成的初速度，这种速度和各种D-氨基酸，如丙氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和亮氨酸的活性有关，这些氨基酸的浓度范围为1~微克/毫升。猪肾来源的氨基酸氧化酶和从羊肾来源的在专一性上是相类似的。D-缬氨酸、D-组氨酸、D-a-氨基丁酸、D-a-氨基戊酸、D-天冬氨酸以及D-氨能反应并被测定。氨基酸混合物可以在分析前用离子交换法加以分离。
二、用L-氨基酸氧化酶测定L-氨基酸
L-氨基酸包括：L-精氨酸、L-亮氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-色氨酸和L-酪氨酸。
蛇毒来源的L-氨基酸氧化酶(L-氨基酸:氧氧化还原酶，E.C.1.4.3.2)如同D-氨基酸氧化酶一样，以十分相似的方式使L氨基酸脱氨。
上述D-氨基酸氧化酶应用的各种分析方法，同样可用于L氨基酸氧化酶系统。例如用测压法检测氧的吸收；用阳离子选择性电极通过电化学方法检测形成的NH2；也可用比色法或荧光光度法跟踪产生的过氧化物。
有文献发现应用过氧物酶-高香草酸组成的荧光跟踪系统能够测定0.01~5.0微克/毫升的L-精氮酸、L-亮氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氮酸、L-色氨酸和L-酪氨酸,平均相对误差约2%(表3-2)。用蛇毒酶时，L-氨基酸反应活泼性的顺序是：L-苯丙氨酸L-甲硫氨酸L-色氮酸L-酪氨酸L-亮氨酸L-精氨酸L-脯氨酸。L-a-氨基戊酸、L-a-氨基已酸以及对位被取代的L-苯丙氨酸也可以测定，但是在这种检测条件下,没有看到其它L-氨基酸具有反应性能。L-氨基酸混合物在分析前必须用离子交换法加以分离。
有文献设计了一种用固定化L-氨基酸氧化酶构成的L氨基酸检测酶电极探针。
三、用L-氨基酸脱羧酶(E.C.4.1.1.-)测定L-氨基酸
L-氨基酸包括：L-赖氨酸、L-酪氨酸、L-精氨酸、L-组氨酸、L-鸟氨酸、L-天冬氨酸和L-谷氨酸。
在特定的条件下从某些细菌产生的L-氨基酸脱羧酶催化反应/p>
下述各种氨基酸都有专一的脱羧酶可供应用：
这些酶的最适pH大多在4.5~6.0之间，并且范围十分狭窄，每一种酶制剂都专一于它相应的L-氨基酸底物。
赖氨酸脱羧酶中可能包含痕量的精氨酸脱羧酶，但当赖氨酸脱羧酶丙酮干燥制剂在0℃放置2~3天后就可移除；同样，组氨酸脱羧酶中痕量的谷氨酸脱羧酶杂质也只要将该酶的丙酮干粉放在pH8.5的硼酸缓冲液中37℃保温过夜后就能除去。
酪氨酸脱羧酶作用于苯丙氨酸的速度约为酪氨酸底物的1/15；赖氨酸脱羧酶也能催化羟基赖氨酸脱羧，但速度缓慢。
上述脱羧酶的某些动力学性质及专一性的主要文献来源如表3-3。
最老的技术之一是用(瓦氏)呼吸计以测压法检测释放出来的CO2，但现在已不常用了。十分简便、快速而且较为准确的方法是应用CO2电极，有文献就是用此法检测了L-酪氨酸。CO电极是一种玻璃的pH传感器，在它的表面有一薄层用气体透性膜包被的0.1MNaHCO3，当CO2穿过膜扩散进来后，就和HCO3-反应，并引起pH改变，人们就可以测定这种变化。酪氨酸可测的浓度范围为10-~10~4M。
有文献提出一种应用L-氨基酸脱羧酶检测L-氨基酸的荧光光度分析法，即通过胺氧化酶和过氧化物酶-对-羟苯乙酸(I)混合的指示反应检测主反应中产生的胺。
强荧光的氧化型对-羟苯乙酸产生的速度(荧光度差值/分钟)和氨基酸浓度成正比。
有文献介绍了一种跟踪脱羧酶反应的比色法。产生的胺和二硝基氟基(FDNB)反应转变为相应的二硝基酚衍生物/p>
反应完成以后，过量的FDNB用过量的强碱破坏，胺的DNB衍生物再用氯仿抽提，然后在nm测定其吸光率。
赖氨酸的脱羧产物是尸胺，它和二分子FDNB进行化学计量反应；但是精氨酸的反应产物--胍基丁胺(反应式44)仅和一分子FDNB反应。
有文献报道了尿液酪氨酸的检测，他用的是酪氨酸脱羧酶，以分光光度法测定释放出来的酪胺。血浆中的苯丙氨酸也可用此酶测定。文献中曾用这种酪氨酸脱羧酶，通过脱羧后形成的苯乙烯检测了L-苯丙氮酸。
有文献介绍用L-赖氨酸脱羧酶对L-赖氮酸进行的自动检测法与自动分析仪。使释放出来的CO2和碳酸盐缓冲液反应，引起pH改变，进而导致酚酞指示剂颜色变化，这种变化再通过流通比色杯在nm检测。应用此系统每小时能作40个检测，每天间的变动小于1%。这种仪器只要简单地更换所用的脱羧酶，就可改用于其它氨基酸的检测。
四、用酪氨酸酶检测L-酪氨酸
有文献介绍了一种直接测定血清酪氨酸的新方法，这是一种在酪氨酸酶(多酚氧化酶，E.C.1.14.18.1)存在情况下，根据电流测定检测酪氨酸氧化过程中氧耗速度的方法。检测仪为带有Clark电极的贝克曼(Beckman)葡萄糖分析仪。苯丙氨酸不干扰测定。
