谷氨酰胺酶(GLS)活性检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA
产品规格：管/48样
产品简介：
GLS（EC3.5.1.2）主要存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
本试剂盒利用靛酚蓝比色法测定GLS催化谷氨酰胺生成的氨来计算其酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容：
提取液：液体70mL×1瓶，4℃保存；使用前37℃预热。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5mL提取液溶解。
试剂二A：液体0.4mL×1支，4℃保存。
试剂二B：液体1.6mL×1瓶，4℃保存；临用前将试剂二A倒入试剂二B中混匀（A:B=1：4比例）。
试剂三：液体2mL×1瓶，常温保存。
标准品：液体1mL×1支，10μmol/mL氮标准液，4℃保存；使用前37℃预热。
需自备的仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和双蒸水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1.组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5-10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液），冰上匀浆后于4℃，g离心15min，取上清置于冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（个）：提取液体积（mL）为-0：1的比例（建议万个细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后4℃，g离心15min，取上清置于冰上待测。
二、测定步骤：
1.可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
2.标准液的制备：将标准溶液用提取液稀释8倍得1.25μmol/mL的标准溶液。
3.样品测定
混匀，室温放置30min，nm处读取吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算?A=A测定管-A对照管，?A标准=A标准管-A空白管。
三、GLS酶活性计算：
1.按样本蛋白浓度计算：
单位定义：37℃下每mg蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成1μmolNH3-N定义为一个酶活力单位。
GLS（U/mgprot）=?A÷（?A标准÷C标准）×V酶促÷(V样品×Cpr)÷T
=6.25×?A÷?A标准÷Cpr
2.按样本鲜重计算：
单位定义：37℃下每g组织每小时催化谷氨酰胺生成1μmolNH3-N定义为一个酶活力单位。
GLS（U/g鲜重）=?A÷（?A标准÷C标准）×V酶促÷(W÷V提取×V样品)÷T
=6.25×?A÷?A标准÷W
3.按细胞数量计算：
单位定义：37℃下每万个细胞每小时催化谷氨酰胺生成1μmolNH3-N定义为一个酶活力单位。
GLS（U/cell）=?A÷（?A标准÷C标准）×V酶促÷(V样品÷V提取)÷T
=6.25×?A÷?A标准。
C标准：标准液浓度，1.25μmol/mL；V酶促:酶促反应体积，0.08mL；V提取：加入提取液体积，1mL；V样品：上清液体积，0.mL；T：反应时间，1h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL（蛋白浓度推荐使用BCA法测定）；W：样品质量，g。
注意事项：
1.当测定吸光值大于0.8时，建议将上清液进一步稀释后测量。
2.试剂二配置后尽快使用，若发现变色则不能再用。