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TUhjnbcbe - 2024/6/4 17:22:00

谷草转氨酶(glutamicoxaloacetictransaminase,GOT又称AST)又名天冬氨酸转氨酶;L-天冬氨酸转氨酶,一酮戊二酸转氨酶;E.C.2.6.1.1。

谷草转氨酶(AST)主要分布在心肌,其次是肝脏、骨骼肌和肾脏等组织中。正常时血清中的AST含量较低,但相应细胞受损时,细胞膜通透性增加,胞浆内的AST释放入血,故其血清浓度可升高,临床一般常作为心肌梗死和心肌炎的辅助检查。谷草转氨酶的正常值为0~40单位/升,当谷草转氨酶明显升高,谷草转氨酶/谷丙转氨酶(ALT)大于1时,提示有肝实质的广泛损害,预后不良。

一、概况

1.反应式

砷酸缓冲液,pH7.4,37℃;采用磷酸缓冲液时,最适pH值为7.2~8.0。

2.米氏常数

3.专一性

此酶对L-天冬氨酸是专一的。可代替a-酮戊二酸作为底物的有下列各种化合物:磺基丙氨酸、高磺基丙氨酸,半胱次磺酸中草酸等。

4.激活剂与抑制剂

吡哆醛与磷酸吡多胺具有激活作用,而马来酸、琥珀酸、戊二酸以及已二酸却有抑制作用。

5.纯度要求

所需的纯度至少每毫克蛋白应含单位活性,而含葡糖-1-磷酸脱氢酶(G-1-PDH)、谷-丙转氨酶(GPT)、L-乳酸脱氢酶(LDH)以及L-苹果酸脱氢酶(MDH)应少于0.01%。

6.意义

在各种人与动物组织中皆存在谷草转氨酶(GOT),然而其主要存在于心肌、骨骼肌以及肝脏中。在血清中此酶于30℃下测得的正常水平为每毫升含5~20毫单位活性。

患有心肌梗塞的病人中,有95%以上患者出现GOT水平升高很大,通常,增加至毫单位(即升高5倍),但是,若出现充血性心脏衰竭与肝脏小叶中心部分坏死时,此酶水平可达到每升0毫单位。此酶出现活性增加情况和肌酸激酶(CPK)相似即在24~48小时内增加,在4~7天后恢复正常。GPT活性水平仍然保持恒定。

血清中GOT对于早期检验肝病是行之有效的方法。由于病毒或毒物原因引起的急性肝炎病例中,此酶水平出现为每升含~毫单位数值。对于未痊愈的肝炎病人或患慢性肝炎期间,此酶活性值亦较大。GPT诊断肝病较之GOT更为专一,但是,其灵敏度欠佳。若GOT与GPT的平均比值为0.64,表明为患急性肝炎的征状,而健康人或患有其它各种疾病的人,该比值应大于1。一般是在7~12天内出现高峰值,而后,第3至第5周则恢复正常。在患心肌梗塞病例中,发现GOT与GPT比值水平甚高。

肌肉萎缩症患者GOT水平亦增加,可达每升为~毫单位,然而,其它肌肉疾病患者,此酶水平通常仍保持正常值。

7.稳定性

以冷冻干粉状态保存在4℃下,可稳定6~12个月;以3.2MpH6的硫酸铵悬浮液保存于4℃下,亦能稳定几个月之久。

二、测定方法

1.分光光度法

可采用与苹果酸脱氢酶(MDH,E.C.1.1.1.38)相偶联反应的各种测定方法,于最大吸收波长nm处测量NADH吸光率的下降值。

分光光度法(Karmen)单位规定为:在25℃下,测定波长为nm,每毫升酶液量致使每分钟下降吸光率为0.。此单位乘以0.则可换算为国际单位。此方法是根据斯堪的纳维亚协会临床酶化学委员会所推荐的。

此外,由酶促反应产生的草酰醋酸尚可与24-二硝基苯肼进行偶联反应,由此产生腙,在~nm处有吸光性。选用37℃保温60分钟,而后,将草酰乙酸与肼反应20分钟。若选用~nm波长,则发现由a-酮戊二酸生成的肼对于吸光率影响甚少。对这种方法进行改进,即用柠檬苯胺使草酰醋酸定量地转化为丙酮酸,然后,将丙酮酸与过量的a-酮戊二酸一起反应,则可转化为24-二硝基苯腙。丙酮酸腙可用甲苯萃取,并于~m处进行测定。

一种高特效的测定草酰醋酸的显色试剂,即6-苯甲酰胺基-4-甲氧基-间-甲苯胺氯化重氮盐(商品名为偶氮快紫B),此试剂空白反应发色很浅。测定方法优点是保温时间短,反应线性关系好。可用于“超微量乙酸测定法”。

2.荧光测定

如上所述,由苹果酸脱氢酶偶联反应过程中产生的NADH,可于激发波长或nm处(用汞灯)以及发射波长nm处进行荧光测定。这种方法大部分已被引用到自动化分析仪中进行快速测定。

据固表面荧光法测定原理,还有一种荧光测定GOT的方法。首先,将各种测定GOT用的试剂制成片剂形式放置在硅橡胶薄膜垫上,当加入10~20微升血清时,则可直接跟踪NADH荧光下降速度,由此测得的速度即相当于GOT的活性。用此法测定血清时,测得的结果甚佳,其变异系数为3.3%,而对于相应的分光光度法却为5~6%。

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