保定市论坛

首页 » 常识 » 常识 » 谷丙转氨酶GPT,EC261
TUhjnbcbe - 2023/5/28 20:37:00
北京湿疹专业医院 http://m.39.net/pf/a_9150598.html

谷丙转氨酶(glutamatepyruvictransaminase)又称丙氨酸转氨酶L-丙氨酸转氨酶;一酮戊二酸转氨酶;GPT;E.C.2.6.1.2。丙转氨酶(ALT)主要存在于各种细胞中,尤以肝细胞为最,整个肝脏内转氨酶含量约为血中含量的倍。正常时,只要少量释放入血中,血清中其酶的活性即可明显升高。在各种病毒性肝炎的急性期、药物中毒性肝细胞坏死时,ALT大量释放入血中,因此它是诊断病毒性肝炎、中毒性肝炎的重要指标。肝细胞内谷丙转氨酶的浓度比血清高0~倍。只要有1%的肝细胞坏死,便可使血中酶活性增高1倍,因此转氨酶(尤其是ALT)是急性肝细胞损害的敏感标志。

一、概况

1.反应式

甘氨酰-甘氨酸缓冲液,pH8.0,25℃;磷酸缓冲液最适pH值为7.3~7.8。

2.米氏常数

3.专一性

猪心谷丙转氨酶对L-丙氨酸与L-谷氨酸是颇为专一的。曾发现若用a-酮戊二酸作底物时,活性显示得低(1~2%),同样地,无论是在正向反应中,用2-氨基丁酸、L-已氨酸、L-鸟氨酸、L-天冬氨酸作底物;还是在逆向反应中,用丙酮酸以及下列各种化合物,诸如L-2-氨基丁酸、L-戊氨酸、L-已氨酸、L-天冬氨酸、DL-B-羟基谷氨酸或L-a-氨基已二酸作底物时,此酶亦表现出活性较低。若用牛心来源的谷丙转氨酶所得结果亦是同样的情况。曾发现任何一种谷丙转氨酶与甘氨酸、L-丙氨酸、L-丝氨酸、L-亮氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酸、L-谷氨酸盐以及其它氨基酸皆不起反应。

4.抑制剂

L-谷氨酸盐、L-丙氨酸、L-已氨酸、L-戊氨酸、L-2-氨基丁酸、L-氨基已二酸盐、甘氨酸以及L-天冬氨酸盐皆具有竞争性抑制作用。

5.纯度要求

所需的纯度至少应为每毫克蛋白含80单位活性,而所含L-谷氨酸脱氢酶(GIDH)、谷草转氨酶(GOT)、L-乳酸脱氢酶(LDH)或L-苹果酸脱氢酶(MDH)量应少于0.01%。

6.意义

由于肝脏组织中所含的GPT量为心脏、肌肉、肾组织的三倍所以GPT升高几乎总是由肝病引起的。

血清中此酶的正常值(30℃)为5~24毫单位/毫升,而患病毒性肝炎病人中,则可升高至0~4,单位。正如在第一节中已介绍的GOT测定,当GOT与GPT的活性比值小于1时,一般平均比值为0.64,即表示患有急性肝炎。

患心肌梗塞病而没有并发肝病的病人,曾观察到GPT水平仍为正常。

为了对肝细胞病变与梗阻性黄疸进行鉴别,应同时测量GPT与GOT化验项目,这样,诊断可靠性更高。因此,在观察肝病过程中,此二项试验是很重要的。

7.稳定性

将此酶保存在32M,pH6的硫酸铵悬浮液中,于4℃下可稳定3~6个月。

二、测定方法

1.分光光度法

于nm处测量吸光率的下降值,即吸光率差值A/分钟,此即等于GPT活性。为了使异常的测定值减少至2~4%,则所测得的变异系数约为5.5%。

可采用比色测定法,即将丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应生成腙,于~nm处测定腙的吸光率,其变异系数约为20%。在测定GOT的反应中,丙酮酸反应生成的2,4-二硝基苯腙可用甲苯萃取,而后,于~nm处测量色度值。

2.荧光法

根据上述LDH(E.C.1.1.1.27)与NADH相偶联的酶促反应,可对GPT进行荧光测定,于是在激发波长nm处或发射波长nm处跟踪NADH荧光度的下降值。

1
查看完整版本: 谷丙转氨酶GPT,EC261